Как проводится анализ на сифилис (бледную трепонему)?

Анализ крови на сифилис – это комплекс диагностических исследований, тесно взаимосвязанных и позволяющих максимально точно установить наличие заболевания у человека.

Как диагностируют сифилис?

Как проводится анализ
Как проводится анализ

Сифилис – это одна из патологий, для диагностирования которой очень важным является проведение лабораторных анализов.

Для диагностики сифилиса у пациента в настоящее время применяют следующие исследования:

  1. Проведение прямых тестов, в основе которых лежит результат непосредственного выделения возбудителя treponema pallidum из очагов поражения
  2. Проведение непрямых тестов (нетрепонемных тестов и трепонемных), в процессе которых при взятии крови пациента возможно выявление антител к возбудителю данного заболевания, а именно к treponema pallidum

Как правило, прямой метод позволяет точно выставить диагноз, если обнаруживается возбудитель. Результат можно считать отрицательным, если при проведении исследования биологического материала инфекционный агент не обнаружен. К прямым методам определения заболевания у человека относят темнопольную микроскопию, метод прямой иммунофлюоресценции, а также ПЦР.

Благодаря проведению непрямых методов удаётся установить наличие такой болезни, как сифилис, если инфекция протекает в скрытой форме, то есть без клинических проявлений. Непрямые методы диагностики сифилиса состоят из нетрепонемных тестов и трепонемных.

Перечень нетрепонемных тестов следующий: реакция Вассермана, реакция микропреципитации или РМП и реакция связывания комплемента или РСК.

Трепонемный тест – это проведение РИБТ крови или реакция иммобилизации бледных трепонем, РИФ или реакция иммунофлюоресценции крови, реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), а также проведение иммуноферментного анализа. В последние годы для определения заболевания сифилис рекомендуется применять и учитывать результат в ходе такого метода, как иммунный блот или иммуноблотинг.

Прямые методы диагностирования

Как передается сифилис
Как передается сифилис

Эти способы диагностики сифилиса основываются на непосредственном нахождении возбудителя treponema pallidum в полученном материале от больного человека. Чаще применяют метод темнопольной микроскопии. Материалом для исследования и выявления инфекции служат отделяемое с язвы, с области папулы, а также с бляшки с эрозированной поверхностью. Для проведения диагностики сифилиса таким способом используют обычный микроскоп с конденсором тёмного поля. После обнаружения в материале пациента подвижного возбудителя результат считается положительным. Если же его не выявляют, то итог исследования считают отрицательным.

Для выполнения исследования прямой иммунофлюоресценции на полученный материал наносят некоторое количество меченых противотрепонемных антител, которые способны формировать комплекс “антиген-антитело”, что также указывает на наличие данной патологии у человека. Этот способ применяют при сомнениях  в проведении исследования с материалом, взятым из полости рта либо из прямой кишки.

ПЦР также применяется при исследовании крови, спинномозговой жидкости, сифилидов на предмет наличия заболевания сифилис у больных. И стоит отметить, что при первичном сифилисе результат при наличии болезни составляет от 94%, а при вторичном – от 80%.

В чём суть непрямых методов диагностики?

В случаях проникновения возбудителя такой болезни, как сифилис, в организм человека в его  крови начинается активный синтез антител, которые формируются в ответ на антиген инфекции. И анализ крови на сифилис и основывается на выявлении этих комплексов антиген-антитело.

Первоначально организм синтезирует такой вид антител, как иммуноглобулины M. Они начинают появляться в крови больных через  10-14 дней после заражения. Их максимальный уровень достигается примерно спустя 6 — 9 недель. И именно в этот период количество этих антител максимально, реакция на сифилис всегда положительная и клиника заболевания наиболее яркая. Далее постепенно титр иммуноглобулинов G постепенно снижается и при отсутствии лечения он так и остаётся низким, но никогда уже не будет отрицательным.

Появление антител в виде иммуноглобулинов класса G в крови начинается примерно с конца 4 недели инфицирования. Максимально высокая их концентрация наблюдается в течение следующих 2 лет, но после начинает постепенно снижаться.

Иммуноглобулины класса M помогает выявить такой тест, как реакция иммунофлюоресценции, ИФА и иммуноблоттинг.

Определение иммуноглобулинов G выявляют в случаях проведения РПГА, ИФА, РИФ, а также РИБТ.

Нетрепонемные тесты. Реакция Вассермана

Реакция Вассермана
Реакция Вассермана

Реакция Вассермана – это первый нетрепонемный тест для определения наличия в крови больных инфекции в виде сифилис и назначения лечения. Данная реакция была впервые предложена ещё в  1906 году учёными Вассерманом, Бруком и Нейсером.  Именно на основе проведения анализа начали впервые выставлять сифилис, назначать терапию, определять эффективность проводимого лечения у человека.

Однако теперь этот тест относят к устаревшим, и стараются применять его как можно реже.

Почему?

Дело в том, что реакция Вассермана  — это тест, интерпретируемый субъективно, достаточно длительно выполняемый и дорогой. Реакция Вассермана часто способна давать не только верный результат, например, быть отрицательным, если сифилиса нет, но  также она может быть и ложная положительная. К тому же этот тест не подлежит автоматизации и стандартизации.

Таким образом, реакция Вассерамана теперь, как достоверный анализ крови на сифилис, не используется.

К диагностически значимым и применяемым нетрепонемным тестам на сифилис теперь относят РМП.

Нетрепонемные тесты применяют в качественном варианте и и количественном. Качественная реакция позволяет определить в крови наличие антител, а количественная реакция  основана на двукратном разведении крови пациента.

Расшифровка результатов нетрепонемных тестов

Таблица результатов
Таблица результатов

Положительная реакция при нетрепонемных тестах выявляется уже после 2-4 недель развития твёрдого шанкра. После адекватной терапии наблюдается медленное снижение титров антител и постепенно анализ на их позитивность становится отрицательным.

Также результат лечения основывается на определении снижения титра антител именно в 4 раза на протяжении 1 года после его проведения. Если наблюдается такая картина, то это указывает на успешно проведенное лечение.

Если же титры антител не снижаются, то, речь идёт о проявлении возможной серологической резистентности.

Как видно эти тесты применяют для выявления адекватности лечения. Они выполняются для подтверждения излеченности больных.

Однако, нетрепонемный анализ крови на сифилис не стоит относить к строго специфичным, так как титр антител может повышаться и при инфаркте миокарда, онкологических болезнях, пневмонии, заболеваниях почек и печени, ревматизме и многих других даже физиологических состояниях, как, например, при менструации и беременности.

Поэтому, если после проведения, нетрепонемный тест и полученная реакция оказывается положительная, рекомендуется проводить дополнительные трепонемные исследования, в которых можно определить антиген возбудителя такого заболевания, как сифилис. То есть полученная положительная реакция при этих тестах указывает на то, что стоит ставить трепонемные и искать антиген.

Трепонемные тесты

“Золотой стандарт” или самый достоверный анализ крови на сифилис – это постановка РИФ или реакция иммунофлюоресценции. В основе данного исследования на предмет наличия инфекции у пациента лежит выявление в его крови комплекса антиген-антитело. Данный тест является чувствительным не только при первичном и вторичном сифилисе, но также и позднем его течении и, что не менее важно, даже на стадии инкубационного периода.

РПГА или реакция пассивной гемагглютинации может быть применена для скрининга и подтверждения диагноза. Положительная реакция основывается на определении гемолиза эритроцитов. Положительная реакция гемолиза происходит в результате взаимодействия антител сыворотки, полученной от больных, с антигенами возбудителя болезни сифилис.

РИБТ или реакция иммобилизации в настоящее время малопригодна для выявления именно ранних стадий болезни, к тому же данный тест дорогой и сложный для постановки.

Выполнение ИФА или иммуноферментного анализа также, как и проведение гемолиза эритроцитов при РПГА, стоит относить к скрининговым методам диагностики.

Такой анализ крови на сифилис, как иммуноблоттинг, характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью в случаях диагностики патологии сифилис. Он прост в исполнении, легко интерпретируется и теперь всё чаще рекомендуется отдавать предпочтение данному способу диагностики.

Какие анализы обычно проводят?

Какие анализы проводят

Следует знать, что в каждых отдельных случаях применяют определённый вид анализа, а не все перечисленные выше.

Например, когда проводится профилактическое обследование населения на предмет выявления заболевания сифилис, то предложено выполнять такие реакции, как ИФА или тест для постановки  гемолиза (РПГА), а также РМП. Однако, опять же очень многое зависит от возможности организации здравоохранения, в которой проходит обследование человек. По возможности рекомендуется применять сочетанное обследование и постановку нескольких тестов, особенно это касается больных психоневрологических, кардиологических диспансеров, например, реакция гемолиза и РМП.

При беременности анализ крови на сифилис надо сдавать 3 раза: при постановке пациентки на учёт, в срок от 18 до 20 недель, а также при установлении 32 недель беременности.

При подозрении на первичный сифилис у лиц с характерной клиникой проводят постановку РМП с  РИФ или иммуноблоттинг.

В случаях наличия клиники и подозрения о вторичном сифилисе выполняют РМП с РПГА, или РИФ, или ИФА.

В случаях установления полового контакта с больным сифилисом не позднее 2 месяцев проводят РМП, а также иммуноблоттинг или РИФ.

Подготовка к анализам. Важные особенности

О чём необходимо знать, если вам предстоит сдать кровь на сифилис?

Любая реакция должна проводиться лишь натощак и утром. Накануне нельзя употреблять алкоголь и слишком жирную и тяжёлую пищу, так как может развиться ложная положительная реакция.

Если вам когда-то был выставлен диагноз сифилис, вы проходили этапы лечения по поводу этой патологии, то не стоит скрывать данную информацию от доктора. В любом случае результат вашей крови на сифилис не будет отрицательным, так как перенесение этой инфекции, неважно на каком этапе первичном или вторичном, непременно на это укажет. Отрицательным результат может быть в том случае, если вы никогда им не болели.

Но, как уже указывалось выше, может быть и ложная положительная реакция при определённых состояниях организма, что важно также знать, чтобы полученный результат не пугал пациента и предупреждать его об этом.

Не смотря на достаточно большое количество применяемых анализов (МРП, реакция Вассермана, иммуноблоттинг и другие) единственным наиболее точным и достоверным считается результат обнаружения бледной трепонемы с помощью ПЦР или микроскопии в нативном материале. Все остальные реакции позволяют подтвердить результат, особенно при наличии клиники.